产品货号：
GL1915
中文名称：
全血丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)
英文名称：
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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全血丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)可用于检测全血血浆样品中内源性的丙酮酸含量。
保存：-20℃，避光，有效期6个月。
蒸馏水、96孔板、离心管或小试管、酶标仪
全血丙酮酸(mmol/L)＝{(ΔA测定－ΔA空白)/(ΔA标准－ΔA空白}×0.05×D
也可根据NADH毫摩尔吸光度计算：
全血丙酮酸(mmol/L)＝(ΔA测定－ΔA空白)×(0.261/6.22)×(D/0.167)
ΔA测定＝A测定1－A测定2
ΔA空白＝A空白1－A空白2
ΔA标准＝A标准1－A标准2
D＝(Wb－Wt)/(Wb－Wm)
0.261＝反应液的总体积(mL)
6.22＝NADH毫摩尔吸光度
0.167＝无蛋白上清液体积(mL)
换算公式：丙酮酸(mg/dL)＝丙酮酸(mmol/L)×8.8
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在NADH存在条件下，乳酸脱氢酶(LDH)催化丙酮酸氧化，生成乳酸和NAD+，在弱碱性条件下平衡偏向丙酮酸氧化为乳酸的方向驱动反应，通过酶标仪测定340nm处NADH吸光度的下降速率，计算出丙酮酸含量。
| 组分 | 规格 | 保存 |
| 丙酮酸标准(100mmol/L) | 1mL | 4℃，避光 |
| 蛋白沉淀剂 | 3瓶 | RT，避光 |
| NADH | 2支 | -20℃，避光 |
| NADH Buffer | 3mL | RT |
| PA Assay Buffer | 10mL | RT |
| LDH Solution | 0.3mL | -20℃，避光 |
保存：-20℃，避光，有效期6个月。
蒸馏水、96孔板、离心管或小试管、酶标仪
按NADH∶NADH Buffer=1支∶1mL的比例充分混合，即为N液，4℃避光保存48h有效。临用前，按N液∶PA Assay Buffer=3∶50的比例混合，即为NADH Solution，即配即用。
- 配制好的NADH Solution，4℃保存，24h有效。
- 血中丙酮酸极不稳定，血液抽出后1min就见降低；在蛋白沉淀液上清中的丙酮酸，可4℃稳定8天左右。
- 如果没有酶标仪也可以使用分光光度计测定，但我们推荐采用分光光度计，以使操作系统误差减小到最少；一次不应检测过多样品，以免因为时间误差而导致结果差异较大。
- 抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好，抗凝血样品置于冰浴中送检，尽快分离出血浆等。
- 草酸抗凝剂对LDH有一定的抑制作用。
- 采用乳酸脱氢酶法检测全血丙酮酸时一般不建议采用微板法，由于手工操作差异较大，尤其是该法对操作时间要求极其严格，操作难以标准化、统一化，检测结果不稳定。
- 本法在0～0.25mmol/L范围内呈良好线性，本法特异性和干扰特异性较高，抗干扰能力强，α-酮丁酸会产生正干扰，α-酮戊二酸、β-羟丁酸、草酰乙酸、乙酰乙酸和异柠檬酸等均无干扰。
- 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
- 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
- 配制蛋白沉淀工作液：取1瓶蛋白沉淀剂，直接加入蒸馏水至100mL，充分混匀，即为蛋白沉淀工作液；4℃避光保存，1周有效，该试剂有一定腐蚀性，请小心操作。
- 配制空白对照液：取配制好的蛋白沉淀工作液1mL加入0.67mL蒸馏水(即按3:2比例配制)，混匀，即为空白对照液；4℃避光保存，1周有效。
- 配制标准品工作液：取适量的丙酮酸标准(100mmol/L)，按0.01mL丙酮酸标准(100mmol/L)溶解于19.9mL空白对照液的比例稀释标准品，使浓度达到0.05mmol/L，即为标准品工作液-丙酮酸标准(0.05mmol/L)；4℃避光保存，24h有效。
- 制备无蛋白上清液：抽血前，取试管或离心管编号，分别称重(Wt)并记录，加入6mL蛋白沉淀工作液，再次分别称重(Wm)并记录，冰浴或4℃保存备用。在空腹和休息状态下抽血，不用止血带，不可用力握拳，如果使用止血带，应在穿刺后除去止血带至少等待2min后再抽血；最好用肝素化的注射器抽血，抽取血液后立即注入预先称量的含有蛋白沉淀工作液(预冷至4℃)的试管或离心管中，每管2mL。(如果用血浆测定，每毫升血中用10mg氟化钠和2mg草酸钾抗凝，立即冷却样本，在15min内离心。)颠倒混匀3次，不可产生气泡，待试管或离心管的温度与室温一致时，再称重(Wb)并记录。静置20min以上，4000g离心15min，取上清液(即无蛋白上清液)待用，上清液应澄清，如果浑浊，转移上清液至干净试管或离心管后，再次离心。
- PA加样：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的PA浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
加入物(μL) 空白孔 标准孔 测定孔 空白对照液 167 - - 丙酮酸标准(0.05mmol/L) - 167 - 无蛋白上清液 - - 167 NADH Solution 89 89 89 充分混匀，蒸馏水调零，于340nm处读取空白孔、标准孔、测定孔的吸光度，分别为A空白1、A标准1、A测定1。 LDH Solution 5 5 5 - PA检测：充分混匀，酶标仪检测340nm吸光度，室温孵育2min后再读取空白孔、标准孔、测定孔的吸光度，此后每隔1min读1次吸光度，直至读数稳定，分别为A空白2、A标准2、A测定2。
全血丙酮酸(mmol/L)＝{(ΔA测定－ΔA空白)/(ΔA标准－ΔA空白}×0.05×D
也可根据NADH毫摩尔吸光度计算：
全血丙酮酸(mmol/L)＝(ΔA测定－ΔA空白)×(0.261/6.22)×(D/0.167)
ΔA测定＝A测定1－A测定2
ΔA空白＝A空白1－A空白2
ΔA标准＝A标准1－A标准2
D＝(Wb－Wt)/(Wb－Wm)
0.261＝反应液的总体积(mL)
6.22＝NADH毫摩尔吸光度
0.167＝无蛋白上清液体积(mL)
换算公式：丙酮酸(mg/dL)＝丙酮酸(mmol/L)×8.8
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